En polyacrylamidgel er forberedt med slots i det. Gelen dannes ved at hælde en varm væske polyacrylamid opløsning i en lavvandet boks . Boksen skal indeholde en comblike struktur med tænder , der peger ned i opløsningen. Polyacrylamid bliver en gel hurtigt efter det er blevet hældt , og kammen er fjernet for at afsløre rektangulære huller .
Natriumdodecylsulfat (SDS)
proteinet behandles med natriumdodecylsulfat ( SDS ) for at denaturere underenheder af et stort protein , så hver enkelt kan måles separat. De fordele ved dette er , at SDS giver polypeptiderne en negativ ladning , så de vil vandre mod den negative ende , eller anode af gelen. For det andet , SDS sikrer alle underenheder vil have den samme ladning og derfor alle vil migrere i gelen i henhold til deres molekylmasser stedet for afgifter.
Tilsætning af protein
En lille mængde af DNA eller protein, er placeret i en af de rektangulære huller i den ene ende af gelen. En elektrisk strøm ledes gennem gelen ved neutralt pH . Ca. 10 mikroliter af en DNA-stige samt to kontroller er også fyldt ind i gelen . DNA stigen bruges til at tillade måling af , hvor langt prøven flyttes i færd med elektroforese.
Elektroforese
Maskinen tændes derefter til 100 volt , og lad køre i 30 minutter. Efter at prøverne har været underkastet elektroforese i 30 minutter , er gelen sammen med en bakke fjernet og anbragt i en farvning bakke i omkring tre minutter. Dette efterfølges ved at anbringe gelen i varmt vand i fem minutter. Gelen er nu klar til at blive placeret på lyskassen for at observere bevægelsen af DNA-fragmenter.
Andre overvejelser
Når du ser gelen under lyset bør der tages hensyn til nogle vigtige ting. En celle kan enten være heterozygote eller homozygote for genet afhængigt af, om kopien er til stede eller ikke til stede i begge kopier eller i én . Den heterozygot Resultatet kan vises som et enkelt bånd , fordi DNA-segmenter , der er amplificeret forekommer mere effektivt mørkere i gelen. Et farvestof er også tilføjet så hver polypeptid kan ses både under og efter elektroforese.
Hoteltilbud