The Mane Six:
* Twilight Sparkle: En lilla enhjørning, der studerer magi og lærer om venskab.
* Applejack: En ærlig og hårdtarbejdende orange pony fra Sweet Apple Acres.
* Sjældenhed: En moderigtig og generøs hvid pony, der ejer en butik.
* Pinkie Pie: En munter og energisk pink pony, der elsker fester.
* Fluttershy: En genert og blid gul pony, der elsker dyr.
* Rainbow Dash: En selvsikker og atletisk blå pony, der drømmer om at slutte sig til Wonderbolts.
Andre bemærkelsesværdige karakterer:
* Spike: Twilight Sparkles loyale babydrageassistent.
* Prinsesse Celestia: Den venlige og kloge hersker af Equestria.
* Prinsesse Luna: Celestias søster, der styrer natten.
* Discord: En drilsk og kaotisk enhed, der legemliggør kaos.
* Starlight Glimmer: En tidligere skurk, der lærer vigtigheden af venskab.
* Trickie: En pralende og egoistisk pony, der hævder at være en magtfuld magisk bruger.
* Gilda: En gnaven og oprørsk griffon, som er Rainbow Dashs tidligere bedste ven.
* Derpy Hooves: En klodset og elskelig pony, som er fanfavorit.
* Zecora: En mystisk zebra, der bor i Everfree Forest og praktiserer urtemedicin.
Dette er blot et lille udpluk af de mange karakterer i My Little Pony:Friendship is Magic. Der er mange andre ponyer, væsner og skurke, der spiller vigtige roller i showet!