- Elizabeth Shaw: En ung videnskabsmand, der er en del af besætningen på rumskibet Prometheus. Hun er drevet af sin tro til at finde Ingeniørerne, menneskehedens skabere.
- David: En android, der også er medlem af Prometheus-besætningen. Han er yderst intelligent og nysgerrig, men også hensynsløs og beregnende.
- Weyland: Den administrerende direktør for Weyland Corp., virksomheden, der finansierede Prometheus-ekspeditionen. Han er besat af at finde ingeniørerne og opnå udødelighed.
- Meredith Vickers: Weyland Corp.-repræsentanten på Prometheus. Hun er en hensynsløs og ambitiøs forretningskvinde, der er villig til at gøre alt for at nå sine mål.
- Janek: Kaptajnen på Prometheus. Han er en veteranastronaut, der forsøger at holde sit mandskab sikkert og samtidig opfylde missionens mål.
- Holloway: En biolog på Prometheus, som er Shaws romantiske partner. Han er fascineret af Ingeniørerne og deres kreationer.
- Fifield: En geolog på Prometheus, der er ivrig efter at udforske den fremmede måne. Han er hensynsløs og impulsiv og bringer ofte sig selv og sine besætningsmedlemmer i fare.