Heksene bliver først introduceret i 1. akt, scene 3, da de møder Macbeth og Banquo på heden. De hilser Macbeth med tre profetier:at han vil blive Thane af Cawdor, Thane af Glamis og konge af Skotland. Banquo får også tre profetier, men de er ikke så specifikke. Heksenes profetier planter frø af ambition i Macbeths sind, og han begynder at planlægge at opfylde dem.
Heksene dukker op igen i 3. akt, scene 5, da Macbeth besøger dem i deres hule. De viser ham en række visioner, som repræsenterer hans fremtid og konsekvenserne af hans handlinger. Heksene fortæller også Macbeth, at han vil blive besejret af "Birnam Wood" og "en mand, der ikke er født af kvinde." Disse profetier får Macbeth til at tro, at han er uovervindelig, og han bliver endnu mere hensynsløs i sin jagt på magt.
Heksene spiller en afgørende rolle i Macbeths fald. De sætter de begivenheder i gang, der fører til hans ødelæggelse, og de giver ham den falske følelse af sikkerhed, der i sidste ende fører til hans nederlag. Heksene er en stærk og farlig kraft, og de repræsenterer den mørke side af den menneskelige natur.
Ud over at skabe en følelse af mystik og spænding tjener heksene også til at kommentere stykkets temaer. De repræsenterer de overnaturlige kræfter, der kan påvirke menneskelig adfærd, og de viser, hvor let mennesker kan blive korrumperet af ambitioner og magt. Heksene er en advarsel til publikum om, at ukontrolleret ambition kan føre til tragiske konsekvenser.