Matilda: En smuk ung kvinde, som er genstand for Ambrosios ønske. Hun bliver til sidst dræbt af Ambrosio, efter at hun har afvist ham.
Agnes: En ung nonne, som er Ambrosios elev. Hun bliver forført af Ambrosio og bliver gravid. Hun dør til sidst af fødslen.
Don Raymond: Abbeden i klostret, hvor Ambrosio bor. Han er en klog og retfærdig mand, der forsøger at hjælpe Ambrosio med at overvinde sine fristelser.
Donna Elvira: En velhavende og magtfuld kvinde, der bliver Ambrosios elsker. Hun forråder ham til sidst og overgiver ham til inkvisitionen.
Inkvisitoren: En magtfuld og hensynsløs mand, der præsiderer over Ambrosios retssag og i sidste ende dømmer ham til døden.