Ugældt kærlighed er et tilbagevendende tema i stykket, da flere karakterer er forelsket i en, der ikke vender tilbage til deres kærlighed. For eksempel er Viola forelsket i Duke Orsino, som er forelsket i Olivia. Olivia er til gengæld forelsket i Cesario (som faktisk er Viola i forklædning). Dette skaber et komplekst net af ulykkelig kærlighed, der driver meget af stykkets action og humor.
Forkert identitet er også et centralt træk ved stykket. Viola forklæder sig som en mand ved navn Cesario for at træde i Orsinos tjeneste. Denne forklædning fører til en række misforståelser og komplikationer, da andre karakterer forveksler Viola med en mand og forelsker sig i hende. Den fejlagtige identitet skaber også muligheder for, at Viola kan observere og kommentere de andre karakterer, hvilket bidrager til stykkets humor.
Samlet set er ulykkelig kærlighed og fejlagtig identitet to nøgletræk, der bidrager til humoren og kompleksiteten i Twelfth Night.