I løbet af sommeren 1928 så Ub Iwerks, en af animatorernes arbejde i Disney Brothers Studio i Los Angels, en mus susende rundt i studiet. Virksomheden havde netop mistet rettighederne til Oswald the Lucky Rabbit, deres succesrige tegneseriestjerne. Walt Disney var i hans kontor tegnede skitser til en ny karakter, da han huskede at have set musen. Han tegnede en grov skitse af en gnaver.
Mickey Mouse er født
Ub Iwersk brugte Disneys skitse til at skabe adskillige tegninger af karakteren. Disney kunne lide designet og gav musen navnet Mickey Mouse. Iwerks og Disney samarbejdede om at skabe den første Mickey Mouse tegnefilm, "Steamboat Willie". Tegnefilmen var en stor succes, og Mickey Mouse blev hurtigt en af de mest populære karakterer i verden.
Inspiration fra Charlie Chaplin
Walt Disney blev også inspireret af stumfilmkomikeren Charlie Chaplin, da han skabte Mickey Mouse. Chaplins karakteristiske overskæg, derbyhat og baggy bukser blev alle indarbejdet i Mickeys design. Disney beundrede også Chaplins evne til at formidle følelser uden at bruge ord, og han ville have Mickey Mus for at have samme evne.