Kirby-Bauer-teknikken er en standard mikrobiologisk metode, der bruges til at bestemme bakteriers modtagelighed for antimikrobielle midler. Det involverer måling af hæmningszonen for bakterievækst omkring antibiotika-imprægnerede skiver placeret på en agarplade, der er podet med testorganismen. Her er de generelle trin i Kirby-Bauer-teknikken:
1. Fremstilling af inokulum :
- En ren kultur af testbakteriesammen opnås og dyrkes i et passende bouillonkulturmedium for at opnå logaritmisk vækstfase (turbiditet).
- Bakteriesuspensionen er standardiseret til en specifik turbiditet, typisk svarende til en 0,5 McFarland turbiditetsstandard, for at sikre en ensartet inokulumdensitet.
2. Podning af agarplade :
- Sterile agarplader indeholdende Mueller-Hinton agar eller et andet passende agarmedium anvendes til testen.
- Ved hjælp af en steril vatpind spredes det standardiserede inokulum jævnt ud over overfladen af agarpladen for at skabe en sammenflydende græsplæne med bakterievækst.
- Den podede plade får lov at tørre i et par minutter for at absorbere overskydende fugt.
3. Anvendelse af antibiotikadiske :
- Sterile antibiotikaskiver, der indeholder specifikke koncentrationer af antimikrobielle midler, placeres på overfladen af agarpladen med jævnt fordelte intervaller ved hjælp af en steril pincet eller en diskdispenser.
- Skiverne presses forsigtigt for at sikre god kontakt med agaroverfladen uden at beskadige skiverne.
4. Inkubation :
- Den podede plade med antibiotikaskiver inkuberes ved en passende temperatur (normalt 35-37°C) i en specificeret periode (typisk 16-24 timer) for at muliggøre bakterievækst og diffusion af antimikrobielle midler.
5. Måling af hæmningszoner :
- Efter inkubation undersøges pladerne for tilstedeværelsen af hæmningszoner omkring antibiotikumskiverne.
- Ved hjælp af en lineal eller en digital skydelære måles diameteren af hver hæmningszone i millimeter.
- Zonediameteren angiver testorganismens modtagelighed for det specifikke antibiotikum.
6. Fortolkning af resultater :
- De målte zonediametre sammenlignes med standardiserede tabeller eller retningslinjer, såsom dem leveret af Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), for at bestemme testorganismens modtagelighed eller resistens over for de testede antimikrobielle midler.
- Organismer er kategoriseret som modtagelige, mellemliggende eller resistente baseret på størrelsen af hæmningszonerne og etablerede fortolkningskriterier.
7. Kvalitetskontrol :
- For at sikre nøjagtigheden og pålideligheden af Kirby-Bauer-teknikken er kvalitetskontrolstammer med kendte modtagelighedsmønstre inkluderet i hver batch af test for at overvåge ydeevnen af metoden og de anvendte reagenser.
Det er vigtigt at følge standardiserede procedurer og fortolke resultater i henhold til etablerede retningslinjer for at opnå pålidelig og klinisk relevant information fra Kirby-Bauers antibiotikafølsomhedstest.