- Horatio Caines kone, Marina, spillet af Sofia Milos: Marina Caim var Horatios kone i de tidlige sæsoner af showet. Hun var oprindeligt en privatdetektiv, der hjalp Horatio i nogle sager. Men deres ægteskab faldt til sidst fra hinanden på grund af Horatios dedikation til sit arbejde.
- Calleigh Duquesne, spillet af Emily Procter: Calleigh Duquesne er en CSI Level 3 og datter af en Miami politibetjent. Hun er en dygtig retsmediciner og er kendt for sin ekspertise inden for DNA-analyse og skydevåbenidentifikation.
- Natalia Boa Vista, spillet af Eva LaRue: Natalia Boa Vista slutter sig til holdet i sæson 5 som CSI Level 2. Hun er en tidligere undercover politibetjent og har en baggrund i psykologi, hvilket hjælper hende med at forstå de kriminelles motiver.
- Delkos kone, Marisol Delko, spillet af Elizabeth Berkley Lauren: Marisol Delko er Eric Delkos kone. De bliver gift i sæsonfinalen af sæson 4. Marisol arbejder også som drabsdetektiv i Miami.
- Yelina Salas, spillet af Sofia Vassilieva: Yelina Salas slutter sig til holdet i sæson 9. Hun er datter af en russisk gangster og har viden om de kriminelle organisationers indre virke.